目前恒溫水槽使用的介質大致有酒精、水、防凍液、食用油、硅油、汽缸油等。水是廉價的的介質，作用范圍一般在5~95℃，但不能覆蓋常用的0℃，而較多恒溫水槽使用防凍液代替水。
　　
　　根據有關研究，凍液與水按1:1混合，在-30℃時性能仍正常。槽的表面溫場與室溫及介質蒸發量有關，常壓下純防凍液表面張力46.49mN/m（而純水表面張力0.728mN/m（20℃）），防凍液與水合后會增加水表面張力，造成分子內聚力增加，從而使得蒸發量小于純水，故其垂直溫場優于純水。此項性能對于射流結構低溫恒溫水槽尤其明顯

　　使用純水和防凍液（按水和防凍液1:1混合）的垂直溫場分別15mK和32mK。當恒溫介質蒸發量大時，需要遮蓋槽面以改善垂直溫場。對擁有射流結構的低溫恒溫水槽（98℃）進行相關實驗。結果顯示：槽面有覆蓋場時，垂直均勻性為12mK，波動性為8mK；無覆蓋物時，垂直均勻性為28mK，波動性為12mK。由此可見，無覆蓋物的影響相當可觀。
　　
　　這在某些無法遮蓋槽面進行檢測工作的情況下需要注意：
　　
　　在高溫時，選擇蒸發量小的工作介質可以減小此類影響，低粘度硅油是一種選擇。使用低粘度硅油作介質實驗，結果顯示：在-30℃時，垂直物均勻性為4mK，波動性為12mK；在100℃，垂直均勻性為2mK，波動性為5mK。
　　
　　食用油也是一種廉價導熱介質，在100~200℃工作范圍得到廣泛使用。但電熱絲通電后溫度很高，食用油非常容易炭化，形成黏性大的顆粒，纏繞在加熱絲上，使其導熱性變差，降低槽溫穩定性。更重要的是降低了加熱絲之間絕緣電阻，導致不安全。因此在100~300℃工作范圍建議使用硅油，并周期更換。
　　
　　如果低溫恒溫水槽在溫度零下40℃到零下100℃，我們可以選擇工業純酒精